Nehéz és hidrofób peptidszintézis

Nehéz peptidszintézis|Hidrofób peptid testreszabás|Nehéz peptidszintézis|Klaszter szekvencia szintézis|Tudomány-Peptid

Túl hidrofób peptidszekvencia? Könnyen összesíthető? Több pár diszulfid kötés? Tudomány-A peptid nehéz peptidszintézis és hidrofób peptidszintézis szolgáltatásai mindenféle „nem sikerül”. 20 éves tapasztalatra, speciális oldószerrendszerekre, stabil szállításra szakosodtak. Kérjük, forduljon hozzánk bizalommal.

Milyen peptideket tekintenek „nehéznek”?
Mivel 20 éve dolgozom a peptidszintézis üzletágban, mindenféle nehéz peptidet láttam. Amikor hozzánk jönnek az ügyfelek, már több céget is megkérdeztek, és azt a választ kapják, hogy „nem tudom megcsinálni”, vagy „Próbálja ki, garancia nincs”.

Erős hidrofób tulajdonságú peptid: transzmembrán régió, szignálpeptid, hidrofób aminosav, szintetizálva összetapad a gyantán, és a mögötte lévő aminosav nem tud bejutni.
A könnyen aggregálódó peptidek, például az amiloid és az antimikrobiális peptidek szintetizálva felhalmozódnak, és tisztításkor eltömítik az oszlopot.
Peptidek több pár diszulfidkötéssel: több mint három pár, egy rossz lépés a párosítási sorrendben, és az egész molekula tönkremegy.
Hosszú peptid: több mint 60 aminosav, a hozam minden lépése csökken, és a végén semmi sem marad.
A módosítások összetett kombinációja: foszforiláció, fluoreszcencia, ciklizáció és egymással harcoló körülmények.
Mindet el tudjuk fogadni, és nem „próbálkozz”, hanem „van egy terved”.

1. Hidrofób peptidek: speciális oldószerrendszerekkel
A hidrofób peptidek nehézsége abban rejlik, hogy nem oldhatók fel hagyományos oldószerekben, és szintetizálva a peptidlánc "összetapad" a gyantán, ami lehetetlenné teszi a mögötte lévő aminosavak bejutását.

A mi megoldásunk:
Speciális oldószerkombináció: DMF, NMP, DCM kevert rendszer, plusz egy kis folyadékleválasztó szer, hogy a peptidlánc megnyúljon.
Hőmérséklet optimalizálás: egyes reakciók jobbak 40 fokon, mint szobahőmérsékleten, néhányat 0 fokra kell csökkenteni, ezeket egyenként próbáltuk ki.
Gyanta kiválasztása: Használjon nagy oldhatóságú gyantát a hidrofób peptidekhez, hogy elegendő hely maradjon a peptidláncoknak.
Oldott címkék: Ha nem tudja, adjon hozzá hidrofil címkét, és a szintézis után vágja le.

Valódi eset: egy 35 aa transzmembrán peptid, hidrofób aminosavak 70%-át, az ügyfél keresett három cég nem lehet megtenni. Megváltoztattuk az oldószer rendszert és felhelyeztük a szolubilizáló címkét, végül a tisztaság 92%, és a megrendelő zökkenőmentesen elvégezte a szerkezetvizsgálatot.

2. Több pár diszulfid kötés: nem szerencse, stratégia
Minél több a diszulfidkötés, annál nehezebb párosítani őket. Két pár jó, de három vagy több pár, és egy rossz lépés, és mindennek vége.
Stratégiánk:
Ortogonális védelem: A Cys lépésenként nyitható és párosítható különböző védőcsoportok használatával, mint például Trt, Acm, tBu.
Oxidációs körülmények optimalizálása: levegő oxidáció, glutation oxidáció, jód oxidáció, különböző módszerek különböző peptidekhez.
Köztes minőségellenőrzés: Minden pár után vegyen mintát az MS-hez, és erősítse meg a párosítást, mielőtt továbblép.
MS/MS megerősítés (opcionális): végső szakítás-másodlagos tömegspektrometriával, hogy megnézze, hol kapcsolódnak ténylegesen a diszulfidkötések.

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >90%-os tisztaság, helyesen párosított diszulfid kötés, a kristályszerkezetet utólag megoldotta a megrendelő.

3. Aggregációra{1}} hajlamos peptidek: védekezés közben szintetizálódik
Egyes peptidek természetesen szeretnek aggregálódni, mint például az amiloid fehérje és az antibakteriális peptid. Szintetizálásukkor aggregálódni kezdenek, tisztításukkor blokkolják az oszlopot, és nem oldódnak fel, amikor kézben vannak.
A mi megoldásunk:
Pszeudoprolin: A pszeudoprolint a Ser/Thr pozícióba vezetik be, hogy megzavarják az aggregációs tendenciát, és a szintézis után visszaváltoznak.
Szegmentális szintézis: A túl polimerizált peptideket több szegmensre vágják, és külön-külön szintetizálják, majd a végén újra összekapcsolják.
A tisztítási körülmények optimalizálása: magas hőmérséklet, savas pH, szerves oldószerek hozzáadása a nem -polimerizálódó körülmények megtalálásához.

4. Komplex módosító kombinációk: harc nélküli feltételek
Egyes peptideknek több követelmény is van: foszforiláció, fluoreszcens jelölés és ciklizálás. Ezek a módosítások ütközhetnek egymással - például a foszforiláció sav-fób, a fluoreszcens jelölés fény-fób, és a ciklizáláshoz meghatározott pH-érték szükséges.
A mi megközelítésünk:
Természetvédelmi stratégia tervezése: melyik vágást kell először elvégezni, melyik vágást később, előre megtervezve.
Ortogonális körülmények: A reakció egyes lépéseinek körülményei nem befolyásolják a már elvégzett módosításokat.
Köztes minőségellenőrzés: A módosítás minden egyes lépése után vegyen mintát, hogy megbizonyosodjon arról, hogy helyesen történt-e, mielőtt továbblép.

5. Tisztaság: attól függően, hogy mit csinálsz vele

Minden peptidet HPLC és MS jelentés kísér, ami átláthatóvá teszi a tisztasági adatokat.

1. 20 éve csináljuk ezt
A nehéz peptidszintézis olyasvalami, amit bárki megtehet. Az évek során rengeteg nehéz peptidet kezeltünk: transzmembrán fehérjék, vírus fúziós peptidek, konotoxinok, amiloid fehérjék, antimikrobiális peptidek stb. Jó elképzelésünk van arról, hogy mely szekvenciák hajlamosak a problémákra, és milyen körülmények képesek megmenteni őket. Legalább nem kell mindegyiket kipróbálnia, ha nehéz és hidrofób peptidszintézis miatt jön hozzánk.

2. Nem "próbáld meg", hanem "legyen programod".
Sok cég nehéz peptideket vesz fel, és azt mondja: "Megpróbáljuk, de nem garantáljuk". Mi nem így játszunk. A rendelés elfogadása előtt értékeljük a szekvenciát, hogy mekkora a hidrofób aminosavak aránya, ismert-e aggregációs hajlam, hány pár diszulfid kötés van, és hogy a módosítás összetett-e vagy sem. Az értékelés után elmondjuk: mi a sikerességi arány és mennyi a ciklusidő.

Nem vállalunk fel nem teljesíthető rendelést, hanem át kell adnunk azokat a megrendeléseket, amiket felvettünk.

3. Speciális oldószerrendszerek hidrofób hatásra
A hidrofób peptid az erősségünk. Ha a hagyományos oldószer nem oldható, akkor az oldószert cseréljük; ha a hagyományos hőmérséklet nem reagál, beállítjuk a hőmérsékletet; ha a hagyományos gyanta nem bírja ki, cseréljük a gyantát. Van még egy szolubilizáló címke, mint egy hátsó kiút.

4. Több pár diszulfid kötés, lépésről--lépésre
Ha háromnál több pár diszulfidkötés van, akkor lépésről lépésre -a-lépésre lépünk: az első lépés az A védelme és az első pár megnyitása; védje meg B-t és nyissa ki a második párt; védje meg a C-t és nyissa ki a harmadik párt. Minden lépés után mintákat veszünk az MS-hez, és a továbblépés előtt megerősítjük a párosítást. Végül az MS/MS megtörik és ellenőrzik, és az adatokat az Ön találgatása nélkül megkapja.

5. Minőségellenőrzés: adatok minden lépésben
A nehéz peptidek minőség-ellenőrzésének óvatosabbnak kell lennie:
Közbenső minőségellenőrzés: Minden fragmens és minden módosítási lépés után először mérje meg a tisztaságot és a molekulatömeget.
Végtermék: HPLC a tisztaság, MS a molekulatömeg.
Oldhatósági teszt: Adja meg az ajánlott oldószereket és szolubilizálási módszereket, hogy ne kapjon fel nem oldódó peptideket.
A nehéz és hidrofób peptidszintézis során az adatok magukért beszélnek, minden lépés nyomon követhető.

• Szállítási forma: liofilizált por, centrifugacsövek vagy fiolák.
• Kísérő dokumentumok: COA (HPLC profil + MS spektrum), szintézis jelentés (opcionális).
• Választható vizsgálatok: peptidtartalom, endotoxin, nedvesség, aminosav összetétel, oldhatósági vizsgálat.
• Személyre szabott csomagolás: adagolás és jelölés az Ön igényei szerint.
• Minden nehéz és hidrofób peptidszintézis terméket felülvizsgálnak, hogy megbizonyosodjon arról, hogy a sorrend helyes, és a tisztaság megfelel a szabványnak, mielőtt kiküldik.

Akár mások elutasították Önt, akár nem tudja megtenni a saját laborjában, beszéljen velünk. Ha Science{1}}peptidet keres nehéz és hidrofób peptidszintézis elvégzéséhez, legalább nem kell egyenként próbálkoznia.

El kell mondanom:
Peptidszekvencia (vagy célinformáció)
Csinált már valaki mást? mi az eredmény?
Mennyi (milligramm)
tisztasági követelmények

Mikor akarod?

24 órán belül megvalósíthatósági értékelést és programajánlatot ad.